Plásmido Doble Nickase (m) SMO/Smoothened: sc-435662-NIC

El gen Smo del ratón codifica Smoothened (SMO), un transductor de señales de siete dominios transmembrana que transmite la actividad de la vía Hedgehog aguas abajo de PTCH1 para regular programas transcripcionales dependientes de GLI que controlan el patrón embrionario, el comportamiento de células madre y progenitoras, y la homeostasis tisular. La activación de SMO influye en eventos de señalización dependientes del cilio primario y se integra con vías que gobiernan la proliferación, la diferenciación y las decisiones de destino celular. La desregulación de la señalización Hedgehog–SMO está implicada en anomalías del desarrollo y procesos oncogénicos, incluido el crecimiento aberrante y la especificación de linaje en múltiples tejidos, lo que convierte a Smo en un nodo ampliamente utilizado para estudios mecanísticos de la regulación de la vía Hedgehog.

SMO/Smoothened El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Smo en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Smo. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Smo. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Smo alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.