Partículas Lentivirales de Activación (h) SMG5: sc-406989-LAC

SMG5 codifica un componente central de la maquinaria de degradación de ARNm mediada por codones sin sentido (NMD, por sus siglas en inglés), que favorece la vigilancia y la eliminación de transcritos que contienen codones de terminación prematuros. SMG5 coopera con SMG6 y SMG7 aguas abajo de la fosforilación de UPF1 para reclutar complejos de fosfatasas proteicas y facilitar la desfosforilación de UPF1, acoplando la terminación de la traducción con la degradación del ARNm. Mediante esta función, SMG5 contribuye a mantener el control de calidad del ARN, modela la homeostasis del transcriptoma e influye en las respuestas al estrés celular y en programas de diferenciación. La NMD desregulada y la función alterada de SMG5 se han relacionado con redes de expresión génica aberrantes implicadas en la biología del cáncer y en mecanismos de enfermedades del neurodesarrollo y neurodegenerativas, lo que convierte a SMG5 en un nodo útil para la investigación de vías.

Las partículas de activación lentiviral SMG5 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SMG5 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SMG5 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SMG5, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SMG5. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SMG5 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.