Plasmide CRISPR/Cas9 KO SmcY (h2): sc-403217-KO-2

Présentation

KDM5D code la lysine déméthylase SmcY, liée au chromosome Y. Il s’agit d’une enzyme à domaine JmjC qui retire les marques H3K4me3/me2 afin de réguler des programmes transcriptionnels et l’accessibilité de la chromatine. En remodelant la méthylation des histones associée aux promoteurs, SmcY contribue au contrôle épigénétique des transitions d’état cellulaire, à l’expression génique restreinte à certaines lignées et à la coordination de processus dépendants de l’ADN tels que la réplication et la réparation. Des variations ou une dérégulation de l’activité de la famille KDM5 ont été associées à des phénotypes de différenciation et de prolifération altérés, et KDM5D est fréquemment étudié dans le contexte de la régulation génique spécifique au sexe masculin et des contributions liées au chromosome Y à la biologie des maladies. En tant que modificateur épigénétique, SmcY constitue un point d’entrée accessible pour analyser comment la dynamique de la méthylation des histones influence les sorties de signalisation et la régulation du génome dans les cellules humaines.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SmcY (h2) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène KDM5D dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du KDM5D, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert KDM5D à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SmcY.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en KDM5D pour l'étude de la signalisation de SmcY, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de KDM5D essentiels à la fonction de SmcY
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de KDM5D pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SmcY plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SmcY plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus KDM5D. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SmcY plasmide HDR (h) et le SmcY (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie KDM5D pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles KDM5D définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.