Plásmido Doble Nickase (m) SmcX: sc-423030-NIC
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (m)SmcX consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SmcX (m) y el plásmido de doble nickasa SmcX (m2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a Kdm5c. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SmcX Anticuerpo (G-10): sc-376255
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (m) SmcX | sc-423030-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (m2) SmcX | sc-423030-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Kdm5c (SmcX) codifica una desmetilasa de lisina de histonas ligada al cromosoma X que elimina las marcas H3K4me2/3 para moldear programas transcripcionales y la accesibilidad de la cromatina en células de ratón. SmcX participa en la regulación epigenética del desarrollo neuronal, la función sináptica y las decisiones de destino celular al modular la actividad de promotores y potenciadores dentro de vías de expresión génica dependientes de la ARN polimerasa II. La alteración de Kdm5c modifica la transcripción dependiente de la actividad y se asocia con fenotipos del neurodesarrollo, lo que proporciona un punto de entrada mecanístico para estudiar la regulación de la cognición y el comportamiento impulsada por la cromatina. Además, el control dependiente de Kdm5c de la diferenciación y de la transcripción asociada al ciclo celular respalda la investigación sobre la remodelación epigenética específica del contexto en distintos tejidos.
SmcX El plásmido de doble nicasa (m) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus Kdm5c en líneas celulares mouse. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de Kdm5c. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de Kdm5c. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con Kdm5c alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.