Plasmide CRISPR d'Activation (h) SMC3: sc-403950-ACT

SMC3 code une protéine essentielle de la maintenance structurale des chromosomes, qui s’associe à SMC1A et à des sous-unités connexes pour former le complexe cohésine, établir la cohésion des chromatides sœurs pendant la phase S et assurer une ségrégation chromosomique fidèle. Au-delà de la mitose, la dynamique de la cohésine dépendante de SMC3 régule la réparation des cassures double brin de l’ADN, la stabilité des fourches de réplication et l’organisation du génome à un niveau supérieur, influençant la communication entre enhancers et promoteurs ainsi que les programmes transcriptionnels. Ces fonctions placent SMC3 au cœur des voies qui contrôlent la stabilité du génome et la progression du cycle cellulaire, et sa dérégulation est associée à des phénotypes d’instabilité chromosomique et à des troubles du développement liés à la cohésine. En biologie du cancer, les altérations de l’activité de la cohésine impliquant SMC3 sont fréquemment étudiées pour leurs effets sur l’aneuploïdie, la capacité de réparation de l’ADN et la reprogrammation transcriptionnelle.

SMC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SMC3 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SMC3 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SMC3 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SMC3, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SMC3. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SMC3 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SMC3 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SMC3 dans les cellules tumorales présentant une expression de SMC3 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.