Plásmido Doble Nickase (h) Smad7: sc-400251-NIC

SMAD7 codifica Smad7, un SMAD inhibidor que proporciona un control de retroalimentación negativa de la señalización de TGF-β y BMP al interferir con la fosforilación mediada por receptores de los SMAD regulados por receptores y al promover el recambio del receptor. Mediante la modulación de la transcripción dependiente de SMAD, Smad7 influye en la transición epitelio-mesenquimal, la remodelación de la matriz extracelular, la señalización inmunitaria e inflamatoria y la regulación del ciclo celular. La actividad desregulada de SMAD7 se ha asociado con respuestas fibróticas alteradas y fenotipos inflamatorios, así como con funciones dependientes del contexto en la progresión tumoral a través de sus efectos sobre la salida de la vía de TGF-β. Como punto de control de la vía, SMAD7 se estudia con frecuencia para analizar la amplitud y la temporización de la señal en redes canónicas TGF-β/SMAD y su comunicación cruzada con las vías MAPK y NF-κB.

Smad7 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMAD7 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMAD7. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMAD7. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMAD7 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.