Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
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Smad6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421529
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Smad6 El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Smad6, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Smad6 Anticuerpo (D-4): sc-25321
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Smad6 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-421529 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
SMAD6 es un SMAD inhibidor que atenúa la señalización aguas abajo de los receptores de BMP y, en algunos contextos, de TGF-β, al interferir con la fosforilación de los SMAD regulados por el receptor y con la formación de complejos. En células de ratón, Smad6 ayuda a ajustar los programas transcripcionales impulsados por BMP que gobiernan el patrón del desarrollo, la diferenciación osteogénica y condrogénica, y la homeostasis vascular. Al modular la señalización canónica mediada por SMAD, SMAD6 contribuye al control de la remodelación de la matriz extracelular, las decisiones de destino celular y la regulación por retroalimentación de las vías de morfógenos. La actividad desregulada de Smad6 se ha vinculado con una salida anómala de la vía de BMP y con fenotipos relevantes para la biología cardiovascular y esquelética congénita, lo que la convierte en un nodo útil para estudios mecanísticos sobre la restricción de la vía.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Smad6 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Smad6 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Smad6 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Smad6 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Smad6.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Smad6 para la investigación de la señalización de Smad6, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Smad6 críticos para la función de Smad6
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Smad6 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Smad6 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Smad6 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Smad6. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Smad6 (m) y el plásmido HDR Smad6 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Smad6 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Smad6 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.