Plásmido Doble Nickase (h) Smad2: sc-400475-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Smad2 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Smad2 (h) y el plásmido de doble nickasa Smad2 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SMAD2. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Smad2 Anticuerpo (A-11): sc-393312
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Smad2 | sc-400475-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) Smad2 | sc-400475-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
El SMAD2 humano codifica Smad2, un SMAD regulado por receptores que transduce señales de TGF-β y activina/NODAL desde los receptores de tipo I hasta el núcleo, donde se asocia con SMAD4 para modular programas transcripcionales que controlan la regulación del ciclo celular, la diferenciación, la remodelación de la matriz extracelular y la señalización inmunitaria. La actividad de Smad2 está determinada por la fosforilación en el extremo C-terminal, el transporte nucleo-citoplasmático y el crosstalk con las vías MAPK y PI3K/AKT, integrando señales de crecimiento y estrés dependientes del contexto. La desregulación de la señalización de SMAD2 se ha implicado en alteraciones de la dinámica epitelio-mesenquimal, la remodelación fibrótica, estados transcripcionales asociados a la inflamación y la biología tumoral mediante la perturbación de las salidas canónicas de la vía de TGF-β. Como nodo central en la señalización de la superfamilia TGF-β, SMAD2 se estudia con frecuencia para analizar el cableado de la vía, el ensamblaje de complejos transcripcionales y las respuestas de redes génicas aguas abajo.
Smad2 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SMAD2 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SMAD2. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SMAD2. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SMAD2 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.