Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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Smad2 Double Nickase Plasmid (h): sc-400475-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das Smad2 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- Smad2 Double-Nickase-Plasmid (h) und Smad2 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf SMAD2 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: Smad2: sc-393312
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
Smad2 Double Nickase Plasmid (h) | sc-400475-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Smad2 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-400475-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Das humane **SMAD2**-Gen kodiert **Smad2**, ein rezeptorreguliertes SMAD-Protein, das TGF-β- sowie Activin/NODAL-Signale von Typ-I-Rezeptoren in den Zellkern weiterleitet, wo es mit **SMAD4** zusammenwirkt, um Transkriptionsprogramme zu modulieren, die Zellzyklusregulation, Differenzierung, Umbau der extrazellulären Matrix und Immun-Signalgebung steuern. Die Smad2-Aktivität wird durch C-terminale Phosphorylierung, nukleo-zytoplasmatisches Shuttling und Crosstalk mit MAPK- und PI3K/AKT-Signalwegen geprägt und integriert so kontextabhängige Wachstums- und Stresssignale. Eine dysregulierte SMAD2-Signalgebung wurde mit veränderter epithelial-mesenchymaler Dynamik, fibrotischem Remodeling, entzündungsassoziierten Transkriptionszuständen und Tumorbiologie in Verbindung gebracht, indem kanonische Outputs des TGF-β-Signalwegs gestört werden. Als zentraler Knotenpunkt der Signalgebung der TGF-β-Superfamilie wird **SMAD2** häufig untersucht, um die Verschaltung des Signalwegs, die Assemblierung von Transkriptionskomplexen und nachgeschaltete Gen-Netzwerkantworten zu analysieren.
Smad2 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des SMAD2-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von SMAD2 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die SMAD2-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit SMAD2-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.