Smad2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-421525

Descripción general

Smad2 codifica un transductor de señales intracelular en la vía canónica de TGF-β/Activina/Nodal, y funciona como un R-SMAD que es fosforilado en el extremo C-terminal por receptores de tipo I y forma complejos transcripcionales con SMAD4. En células de ratón, SMAD2 regula programas génicos que controlan el patrón embrionario, las decisiones de destino de las células madre, la transición epitelio-mesenquimal, la remodelación de la matriz extracelular y la modulación inmunitaria. Mediante una regulación transcripcional dependiente del contexto, SMAD2 influye en la proliferación, la diferenciación y la apoptosis, integrando señales de ligandos de la superfamilia TGF-β con otras redes de señalización. La desregulación de la señalización de SMAD2 se ha implicado en procesos relacionados con la fibrosis, fenotipos inflamatorios y la biología tumoral a través de una salida alterada de la vía y de cambios en la expresión de genes diana.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Smad2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Smad2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Smad2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Smad2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Smad2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Smad2 para la investigación de la señalización de Smad2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Smad2 críticos para la función de Smad2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Smad2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Smad2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Smad2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Smad2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Smad2 (m) y el plásmido HDR Smad2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Smad2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Smad2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.