Plásmido CRISPR de Activación (h) SLX4IP: sc-407109-ACT

La SLX4IP humana (proteína que interactúa con SLX4) es un factor nuclear implicado en el mantenimiento de la integridad del genoma mediante interacciones con redes de endonucleasas específicas de estructura y andamiajes de reparación del ADN. Se ha relacionado con vías que regulan las respuestas al daño del ADN asociado a la replicación, la homeostasis de los telómeros y la resolución de estructuras complejas de ADN que pueden surgir durante el estrés replicativo. La alteración de la expresión de SLX4IP se ha asociado con mecanismos de regulación de la longitud telomérica que influyen en la capacidad proliferativa celular y en fenotipos de estabilidad del genoma. Estas funciones hacen de SLX4IP una diana útil para investigar la organización de las vías de reparación del ADN, la estabilidad cromosómica y programas de adaptación al estrés relevantes para el cáncer y otras afecciones asociadas a la inestabilidad genómica.

SLX4IP El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLX4IP sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLX4IP El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLX4IP en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLX4IP, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLX4IP. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLX4IP y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLX4IP en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLX4IP en células tumorales con expresión de SLX4IP silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.