Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLMAP: sc-406756-ACT

SLMAP (sarcolemma associated protein) code une protéine membranaire à ancrage C‑terminal (« tail-anchored ») qui se localise principalement au réticulum sarcoplasmique/endoplasmique et à des compartiments membranaires apparentés, où elle contribue à l’organisation des membranes et au couplage avec le cytosquelette. Elle est impliquée dans des processus liés à l’excitation–contraction, le trafic intracellulaire et la régulation de la dynamique des microtubules, reliant l’échafaudage membranaire à la transduction du signal et au maintien de l’homéostasie structurelle. Dans les contextes du muscle strié et du cœur, SLMAP a été associée à des voies liées à la gestion des ions et à la conduction, et des modifications d’expression ou des allèles variants ont été rapportés dans des études portant sur la cardiomyopathie et la susceptibilité aux arythmies. Ces caractéristiques font de SLMAP une cible utile pour disséquer les réseaux d’échafaudage associés aux membranes et leur impact sur l’architecture cellulaire et des phénotypes pertinents pour l’électrophysiologie.

SLMAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLMAP sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLMAP Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLMAP dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLMAP, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLMAP. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLMAP natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLMAP au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLMAP dans les cellules tumorales présentant une expression de SLMAP silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.