Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLK: sc-406490-ACT

La kinase SLK (STE20-like kinase) humaine code une kinase sérine/thréonine impliquée dans le remodelage du cytosquelette, le renouvellement des adhésions focales et la régulation de la motilité et de la polarité cellulaires. SLK participe à des réseaux de signalisation liés aux cascades de kinases de type MAPK et à des voies sensibles au stress, qui coordonnent la dynamique de l’actine avec la progression du cycle cellulaire et l’apoptose. Par ses effets sur la signalisation dépendante de l’adhérence et l’architecture tissulaire, une activité altérée de SLK a été associée à des phénotypes pertinents pour l’invasion des cellules tumorales, l’intégrité épithéliale et des anomalies du développement. SLK est donc fréquemment étudiée dans des modèles de migration, de morphogenèse et de dialogue entre voies de signalisation, qui relient des signaux mécaniques à des programmes transcriptionnels.

SLK Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLK sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLK Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLK dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLK, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLK. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLK natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLK au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLK dans les cellules tumorales présentant une expression de SLK silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.