Plásmido CRISPR de Activación (h) Slfn14: sc-415573-ACT

El gen humano **SLFN14** codifica el miembro 14 de la familia Schlafen (**Slfn14**), una presunta proteína de unión a ARN implicada en la regulación postranscripcional y en el control de la síntesis proteica en linajes hematopoyéticos. Las proteínas SLFN se asocian de forma amplia con la señalización de la inmunidad innata y las respuestas al estrés celular, con funciones que pueden influir en el manejo de ARN asociado a ribosomas y en la producción traduccional. **SLFN14** es especialmente relevante para la biología plaquetaria, y la alteración de su función se ha relacionado con trombocitopenia hereditaria y fenotipos de disfunción plaquetaria. Estas características hacen de **SLFN14** un nodo útil para estudiar el control de la expresión génica en la maduración de los megacariocitos, la producción de plaquetas y programas regulatorios vinculados a la inmunidad.

Slfn14 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLFN14 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Slfn14 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLFN14 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLFN14, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Slfn14. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLFN14 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Slfn14 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Slfn14 en células tumorales con expresión de SLFN14 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.