Slfn13 CRISPR Activationプラスミド (h): sc-414596-ACT

ヒトSLFN13（Schlafenファミリーメンバー13）は、自然免疫の制御や細胞ストレス応答に関与するとされるインターフェロン刺激性タンパク質Slfn13をコードします。Schlafenファミリーのタンパク質は一般に、I型インターフェロンシグナル伝達の下流で作動する抗ウイルスプログラムに加え、細胞周期の進行や分化の制御と関連づけられており、免疫活性化時の転写・翻訳状態を形成します。SLFN13の発現は炎症環境や腫瘍—免疫相互作用との関連が報告されており、インターフェロン駆動型経路が疾患関連の細胞種における遺伝子発現ネットワークをどのように再編成するかを研究する上で重要です。これらの機能により、Slfn13はインターフェロン応答回路、免疫回避機構、状況依存的な増殖制御を解析するための有用な結節点（ノード）となります。

Slfn13 CRISPR活性化プラスミド（h）は、基盤となるDNA配列を変更することなく、内因性SLFN13の発現を標的化し、非破壊的にアップレギュレートするアプローチを提供します。

Slfn13 CRISPR 活性化プラスミド (h) は、ヒト細胞株における SLFN13 遺伝子座の高効率かつ部位特異的な転写アップレギュレーションのために設計された、3 つのプラスミドからなる相乗的活性化メディエーター (SAM) システムです。このシステムは、DNA結合能を維持しつつヌクレアーゼ活性を失わせる2つの不活性化変異（D10AおよびN863A）を有する、触媒活性のないCas9（dCas9）を中核としています。このdCas9は、強力な転写活性化因子であるVP64と融合しており、選別用のブラスティシジン耐性遺伝子と共に共発現します。2番目のプラスミドは、dCas9-VP64と協調して機能する二次活性化複合体であるMS2-p65-HSF1融合タンパク質をコードしており、ヒグロマイシン耐性遺伝子と共に発現する。3番目のプラスミドは、標的特異的な20塩基対のsgRNAをコードしており、これはMS2-p65-HSF1複合体を活性化部位に誘導する2つのMS2 RNAアプタマーと融合しており、さらにピューロマイシン耐性遺伝子が付随している。これら3つのプラスミドは、システム構成要素すべてが均等に発現するよう、質量比1:1:1で導入される。

標的遺伝子座に集合すると、SAM複合体はSLFN13転写開始点の上流約200 bpの領域に結合し、そこでVP64、p65、およびHSF1が協調して転写装置を動員し、内因性Slfn13の発現上昇を促進する。ヌクレアーゼ活性を持つCas9とは異なり、 dCas9は二本鎖切断を導入したりゲノム配列を改変したりしないため、天然のSLFN13遺伝子座が保持され、内因性遺伝子座におけるSlfn13依存性の転写応答の研究が可能となります。これにより、機能解析、標的遺伝子の同定、およびSLFN13発現が沈黙または低下した腫瘍細胞におけるSlfn13経路の回復のモデル化を行う上で、貴重なツールとなります。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。