Plásmido CRISPR de Activación (h) Slfn13: sc-414596-ACT

SLFN13 humano (miembro 13 de la familia Schlafen) codifica Slfn13, una proteína estimulada por interferón implicada en la regulación de la inmunidad innata y en las respuestas al estrés celular. Las proteínas de la familia Schlafen se asocian comúnmente con el control de la progresión del ciclo celular, la diferenciación y los programas antivirales aguas abajo de la señalización de interferón tipo I, moldeando los estados transcripcionales y traduccionales durante la activación inmunitaria. La expresión de SLFN13 se ha vinculado a contextos inflamatorios y a interacciones entre tumor e inmunidad, lo que la hace relevante para estudiar cómo las vías impulsadas por interferón remodelan redes de expresión génica en tipos celulares relevantes para la enfermedad. Estas funciones sitúan a Slfn13 como un nodo útil para investigar los circuitos de respuesta al interferón, los mecanismos de evasión inmunitaria y la regulación del crecimiento dependiente del contexto.

Slfn13 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLFN13 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Slfn13 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLFN13 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLFN13, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Slfn13. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLFN13 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Slfn13 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Slfn13 en células tumorales con expresión de SLFN13 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.