Plásmido CRISPR de Activación (h) Slfn12: sc-404339-ACT

El SLFN12 humano (miembro 12 de la familia Schlafen) codifica Slfn12, una proteína citoplasmática de la familia Schlafen implicada en la regulación de la diferenciación celular, el control de la proliferación y la modulación dependiente del contexto de la expresión de genes asociados al sistema inmunitario. Las proteínas Schlafen se relacionan comúnmente con la señalización estimulada por interferón y con procesos del metabolismo del ARN, moldeando programas de traducción y respuestas al estrés que influyen en los estados de las células epiteliales y hematopoyéticas. Se ha descrito una expresión alterada de SLFN12 en múltiples contextos relevantes para enfermedades, incluida la señalización inflamatoria y fenotipos asociados al cáncer, donde con frecuencia se observan cambios en vías de diferenciación y crecimiento. En consecuencia, SLFN12 es de interés para analizar redes transcripcionales y postranscripcionales que acoplan la señalización innata con el compromiso de linaje y la homeostasis celular.

Slfn12 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLFN12 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Slfn12 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLFN12 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLFN12, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Slfn12. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLFN12 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Slfn12 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Slfn12 en células tumorales con expresión de SLFN12 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.