Plásmido Doble Nickase (h) Slfn11: sc-401137-NIC

SLFN11 (Slfn11) es un factor nuclear asociado al ADN/ARN que modula las respuestas celulares al estrés replicativo y al daño genotóxico, influyendo en la estabilidad del genoma y en la progresión del ciclo celular. Se vincula con la señalización de la respuesta al daño del ADN y con la dinámica de las horquillas de replicación, donde puede influir en el desenlace de la replicación detenida y de los conflictos transcripción–replicación. La actividad de SLFN11 se cruza con vías activadas por la inhibición de topoisomerasas y por procesos de reparación de entrecruzamientos del ADN, lo que lo convierte en un determinante ampliamente estudiado de la tolerancia al estrés en células proliferantes. La desregulación de la expresión o la función de SLFN11 se ha investigado en biología del cáncer y en otras afecciones en las que son prominentes una capacidad de reparación del ADN alterada y el estrés replicativo.

Slfn11 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SLFN11 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SLFN11. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SLFN11. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SLFN11 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.