Plásmido CRISPR de Activación (h) SLC35G1: sc-405723-ACT

SLC35G1 codifica una proteína de membrana prevista de la familia de transportadores de solutos 35, implicada en el transporte intracelular de azúcares nucleótido y en procesos asociados a la glicosilación dentro de la vía secretora. Al influir en la disponibilidad de azúcares activados para el ensamblaje de glicanos, SLC35G1 está en posición de modular la glicosilación de proteínas y lípidos, lo que puede afectar el plegamiento y el tráfico de proteínas, así como la comunicación célula–célula. Las alteraciones en la glicosilación y en la actividad de transportadores se asocian con frecuencia a una señalización desregulada y a respuestas de estrés, lo que convierte a SLC35G1 en un objetivo útil para investigar cómo el metabolismo de la vía secretora determina fenotipos celulares. A menudo se estudia SLC35G1 en el contexto del tráfico de membrana, la proteostasis y la regulación dependiente de glicanos de la función de receptores y moléculas de adhesión relevantes para estados celulares asociados a enfermedad.

SLC35G1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLC35G1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLC35G1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLC35G1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLC35G1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLC35G1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLC35G1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLC35G1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLC35G1 en células tumorales con expresión de SLC35G1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.