SLC35D1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-407065

Übersicht

SLC35D1 kodiert einen im Golgi-Apparat lokalisierten Nukleotidzucker-Transporter, der den Import von UDP-Glucuronsäure und UDP‑N‑Acetylgalactosamin in das Lumen vermittelt und damit die Biosynthese von Glykosaminoglykanen unterstützt. Durch die Kontrolle der Substratverfügbarkeit für Glykosyltransferasen beeinflusst SLC35D1 die Proteoglykanassemblierung, die Organisation der extrazellulären Matrix und die Knorpelentwicklung. Eine Störung von SLC35D1 ist mit skelettdysplastischen Phänotypen verknüpft, die mit einer beeinträchtigten Chondroitinsulfatproduktion und einer veränderten Proteoglykanzusammensetzung vereinbar sind. Daher wird SLC35D1 häufig in Signalwegen untersucht, die mit Golgi-Glykosylierung, Matrixbiologie sowie der Differenzierung von Chondrozyten und anderen Bindegewebslinien zusammenhängen.

Das SLC35D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SLC35D1-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SLC35D1-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SLC35D1 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SLC35D1-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SLC35D1-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SLC35D1-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SLC35D1-Exone abzielen, die für die SLC35D1-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SLC35D1-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SLC35D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom SLC35D1 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SLC35D1-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SLC35D1 HDR-Plasmid (h) und SLC35D1 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SLC35D1-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SLC35D1-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.