SLC25A29 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-406645

Descripción general

SLC25A29 (miembro 29 de la familia de transportadores de solutos 25) codifica un transportador de la membrana interna mitocondrial implicado en el transporte de aminoácidos básicos, en particular arginina, hacia la matriz mitocondrial, para sostener el flujo metabólico a través de la red arginina/ornitina vinculada al ciclo de la urea y del metabolismo relacionado con el óxido nítrico. Al modular la disponibilidad intramitocondrial de aminoácidos, SLC25A29 puede influir en la respiración mitocondrial, el equilibrio redox y las vías biosintéticas que dependen del metabolismo de un carbono y del manejo del nitrógeno. La expresión o actividad alteradas de los transportadores mitocondriales SLC25 se asocian con frecuencia con la reprogramación metabólica y la disfunción mitocondrial observadas en diversos contextos de enfermedad, lo que convierte a SLC25A29 en una diana útil para estudios mecanísticos del transporte mitocondrial de aminoácidos. La investigación sobre SLC25A29 también aporta información sobre cómo la partición de sustratos en la mitocondria afecta a las respuestas celulares al estrés y a la homeostasis energética.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO SLC25A29 (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen SLC25A29 en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del SLC25A29 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de SLC25A29 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SLC25A29.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en SLC25A29 para la investigación de la señalización de SLC25A29, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de SLC25A29 críticos para la función de SLC25A29
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de SLC25A29 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido SLC25A29 CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SLC25A29 CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus SLC25A29. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SLC25A29 (h) y el plásmido HDR SLC25A29 (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología SLC25A29 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana SLC25A29 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.