Plasmide CRISPR d'Activation (h) SLC25A11: sc-404380-ACT

SLC25A11 (transporteur mitochondrial de 2‑oxoglutarate/malate, OGC) est un transporteur de solutés de la membrane interne mitochondriale qui échange le malate contre le 2‑oxoglutarate, assurant ainsi la liaison entre le cycle de l’acide tricarboxylique (cycle de Krebs, TCA) et le métabolisme cytosolique. En soutenant la navette malate‑aspartate et l’équilibre rédox mitochondrial, SLC25A11 contribue à réguler l’homéostasie NADH/NAD⁺, l’anaplérose et le métabolisme oxydatif. Son activité recoupe les flux carbonés alimentés par la glutamine, la gestion des espèces réactives de l’oxygène (ROS) et la reprogrammation métabolique observée dans des états cellulaires prolifératifs ou adaptés au stress. Des altérations de l’expression ou de la fonction de SLC25A11 ont été associées à une dérégulation métabolique pertinente pour la biologie tumorale, la dysfonction mitochondriale et la susceptibilité au stress oxydatif dans divers systèmes expérimentaux.

SLC25A11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de SLC25A11 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SLC25A11 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus SLC25A11 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription SLC25A11, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SLC25A11. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus SLC25A11 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SLC25A11 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SLC25A11 dans les cellules tumorales présentant une expression de SLC25A11 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.