Plásmido CRISPR de Activación (h) SLAMF6: sc-409009-ACT

SLAMF6 (molécula de señalización de activación linfocítica, miembro 6 de la familia; también conocida como NTB-A/CD352) es un receptor de la superfamilia de las inmunoglobulinas que se expresa predominantemente en células T, células NK y en subpoblaciones de células B, donde funciona como un correceptor homofílico que ajusta los umbrales de activación y los programas efectores. A través de la señalización mediada por adaptadores asociados a SLAM, incluidas vías dependientes de SAP/SH2D1A, SLAMF6 influye en eventos proximales de fosforilación de tirosinas y en salidas transcripcionales posteriores que moldean la producción de citocinas, la citotoxicidad y la comunicación cruzada entre linfocitos. Las alteraciones en la señalización de SLAMF6 se han vinculado con una homeostasis inmunitaria desregulada y con patología mediada por el sistema inmunitario, y se examina con frecuencia en contextos de inflamación crónica, infección e inmunología tumoral. Como modulador de superficie tipo “checkpoint” de la función linfocitaria, SLAMF6 se utiliza ampliamente como nodo mecanístico para estudiar la coestimulación de receptores, los estados asociados al agotamiento y las redes de señalización inmunitaria específicas de linaje.

SLAMF6 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SLAMF6 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SLAMF6 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SLAMF6 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SLAMF6, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SLAMF6. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SLAMF6 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SLAMF6 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SLAMF6 en células tumorales con expresión de SLAMF6 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.