Plasmide CRISPR/Cas9 KO SKT (m): sc-431571

Présentation

Le gène murin **Etl4** code la protéine **SKT**, un facteur encore peu caractérisé dont on prévoit qu’il contribue à des programmes régulateurs intrinsèques à la cellule contrôlant l’expression génique et l’homéostasie cellulaire. Les annotations disponibles suggèrent une implication dans des processus fondamentaux tels que la prolifération, la différenciation et les réponses adaptatives au stress, ce qui concorde avec des rôles dans les voies du développement et du maintien des tissus. Comme ce type de régulateurs peut influencer l’architecture des voies de signalisation et la stabilité phénotypique, la perturbation de SKT est utile pour étudier les mécanismes à l’origine d’états cellulaires pertinents pour les maladies, notamment la croissance dérégulée et des programmes de lignée altérés. Les modèles de perte de fonction d’Etl4/SKT permettent de cartographier, dans des cellules murines et in vivo, les conséquences transcriptionnelles et de signalisation en aval.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SKT (m) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène Etl4 dans les lignées cellulaires mouse. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du Etl4, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert Etl4 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SKT.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en Etl4 pour l'étude de la signalisation de SKT, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de Etl4 essentiels à la fonction de SKT
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de Etl4 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SKT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m) et le SKT plasmide CRISPR/Cas9 KO (m2) ciblent des sites distincts au sein du locus Etl4. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SKT plasmide HDR (m) et le SKT (m2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie Etl4 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles Etl4 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.