Plasmide CRISPR d'Activation (h) SKRP1: sc-410316-ACT

DUSP19 code pour SKRP1, une phosphatase à double spécificité qui module la phosphorylation des résidus sérine/thréonine et tyrosine afin d’ajuster les voies de signalisation sensibles au stress. SKRP1 a été associée à la régulation de la dynamique de la voie MAPK, notamment via des interactions croisées avec les cascades JNK et p38, qui façonnent des programmes transcriptionnels contrôlant la prolifération, l’apoptose et l’adaptation cellulaire au stress environnemental. Par son rôle dans la déphosphorylation d’intermédiaires de signalisation, DUSP19 contribue à l’homéostasie de la phosphorylation, influençant la fonction mitochondriale et les sorties de signalisation inflammatoire. Une expression ou une activité altérée de DUSP19 a été associée dans la littérature à une signalisation du stress dérégulée observée dans divers contextes pertinents pour les maladies, ce qui étaye son utilisation comme nœud mécanistique pour des études centrées sur les voies de signalisation dans des cellules humaines.

SKRP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de DUSP19 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SKRP1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus DUSP19 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription DUSP19, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SKRP1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus DUSP19 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SKRP1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SKRP1 dans les cellules tumorales présentant une expression de DUSP19 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.