Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
Datos CRISPR no: la imagen ilustra la calidad de los anticuerpos para visualizar los resultados de los experimentos CRISPR.
SKIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h): sc-407373
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SKIP El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (h) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SKIP, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SKIP Anticuerpo (B-6): sc-365362
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SKIP Plásmido CRISPR/Cas9 KO (h) | sc-407373 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
INPP5K codifica la inositol polifosfato-5-fosfatasa K, comúnmente conocida como SKIP, una fosfatasa de fosfoinosítidos que regula la señalización celular de fosfoinositol al desfosforilar PtdIns(4,5)P₂ y sustratos relacionados. Al ajustar la composición de fosfoinosítidos en las membranas, SKIP influye en la organización del citoesqueleto de actina, el tráfico de membranas y la transducción de señales aguas abajo de vías como PI3K/AKT, que dependen de segundos mensajeros lipídicos localizados. La actividad alterada de INPP5K se ha vinculado a disrupciones en la homeostasis muscular y del neurodesarrollo, lo que la hace relevante para estudios de trastornos congénitos que afectan la función neuromuscular y la arquitectura celular. Dado que los fosfoinosítidos coordinan múltiples compartimentos y procesos, SKIP sirve como un nodo útil para analizar el acoplamiento membrana–citoesqueleto y la dinámica de señalización controlada por fosfatasas en células humanas.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SKIP (h) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen INPP5K en líneas celulares human. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del INPP5K junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de INPP5K tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SKIP.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en INPP5K para la investigación de la señalización de SKIP, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de INPP5K críticos para la función de SKIP
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de INPP5K para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SKIP CRISPR/Cas9 KO (h) y el plásmido SKIP CRISPR/Cas9 KO (h2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus INPP5K. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SKIP (h) y el plásmido HDR SKIP (h2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología INPP5K para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana INPP5K definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.