Partículas Lentivirales de Activación (m2) Skint8: sc-437039-LAC-2

Mouse Skint8 (selección y mantenimiento de linfocitos T intraepiteliales, proteína 8) es un miembro de la familia butirofilina‑like/Skint implicada en la regulación inmunitaria epitelial, con funciones presuntas en moldear la selección y el mantenimiento de las células T en tejidos de barrera como la piel. Las proteínas Skint se asocian en general con la interacción célula‑célula y con programas de señalización dependientes del receptor de antígeno que influyen en la diferenciación de linfocitos en el timo y en la periferia, contribuyendo a la homeostasis inmunitaria de las células residentes en los tejidos. La desregulación de las vías de la familia Skint es relevante para estudios de inflamación cutánea, defensa del huésped en superficies epiteliales y mecanismos de vigilancia inmunitaria. Por ello, Skint8 es un objetivo útil para la edición genética con el fin de investigar el diálogo epitelio‑inmunitario, cartografiar las señales de desarrollo de las células T residentes en tejidos y modelar cómo las redes inmunorreguladoras asociadas a barreras influyen en fenotipos inflamatorios en sistemas murinos.

Las partículas de activación lentiviral Skint8 (m2) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Skint8 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral Skint8 (m2) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Skint8, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de Skint8. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Skint8 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.