Ski Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-422964
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- Ski El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico Ski, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: Ski Anticuerpo (G8): sc-33693
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Ski Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-422964 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Ski codifica la oncoproteína Ski, un corregulador transcripcional nuclear que modula programas de expresión génica que controlan decisiones sobre el destino celular. En células de ratón, Ski se conoce principalmente por antagonizar la señalización de TGF-β/SMAD al interactuar con complejos SMAD y correpresores, dando forma a la transición epitelio-mesenquimal, la deposición de matriz extracelular y la diferenciación. A través de estos efectos en la vía, Ski influye en la proliferación, el compromiso de linaje y la remodelación tisular, procesos que con frecuencia se ven alterados en anomalías del desarrollo y fenotipos asociados al cáncer. Sus funciones reguladoras hacen de Ski un nodo útil para estudiar la transcripción dependiente de señales, la represión asociada a la cromatina y el control del crecimiento específico del contexto.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO Ski (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Ski en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Ski junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Ski tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Ski.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Ski para la investigación de la señalización de Ski, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Ski críticos para la función de Ski
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Ski para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido Ski CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Ski CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Ski. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Ski (m) y el plásmido HDR Ski (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Ski para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Ski definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.