Ski Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-422964

Panoramica

Ski codifica l’oncoproteina Ski, un coregolatore trascrizionale nucleare che modula programmi di espressione genica responsabili delle decisioni sul destino cellulare. Nelle cellule murine, Ski è noto soprattutto per antagonizzare la segnalazione TGF-β/SMAD interagendo con i complessi SMAD e con corepressori, plasmando così la transizione epitelio–mesenchimale, la deposizione della matrice extracellulare e la differenziazione. Attraverso questi effetti sulle vie di segnalazione, Ski influenza la proliferazione, l’impegno di linea e il rimodellamento tissutale, processi spesso alterati in anomalie dello sviluppo e in fenotipi associati al cancro. I suoi ruoli regolatori rendono Ski un nodo utile per studiare la trascrizione dipendente dai segnali, la repressione associata alla cromatina e il controllo della crescita specifico del contesto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO Ski (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Ski in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Ski insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Ski a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina Ski.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Ski per lo studio della segnalazione di Ski, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Ski critici per la funzione di Ski
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Ski per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal Ski CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal Ski CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Ski. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal Ski Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR Ski (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Ski per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Ski definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.