Plásmido Doble Nickase (h) Ska1: sc-415109-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)Ska1 consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa Ska1 (h) y el plásmido de doble nickasa Ska1 (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SKA1. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) Ska1 | sc-415109-NIC | 20 µg | $410.00 |
SKA1 codifica la subunidad 1 del complejo asociado al huso y al cinetocoro (Ska1), un componente central del complejo SKA que acopla las uniones extremo a extremo cinetocoro–microtúbulo a los microtúbulos del huso en despolimerización durante la mitosis. Ska1 favorece una alineación cromosómica estable, el silenciamiento del punto de control del huso y el inicio oportuno de la anafase, manteniendo así la integridad del genoma mediante una segregación cromosómica precisa. La alteración de la función del complejo SKA puede promover inestabilidad cromosómica y aneuploidía, procesos que se estudian con frecuencia en el contexto de trastornos proliferativos y la evolución de células tumorales. En consecuencia, SKA1 se utiliza ampliamente como punto de partida molecular para investigar la dinámica del cinetocoro, el control del punto de control mitótico y la progresión del ciclo celular en células humanas.
Ska1 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SKA1 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SKA1. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SKA1. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SKA1 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.