Plásmido CRISPR de Activación (h) SK1: sc-403325-ACT

KCNN1 codifica el canal humano de potasio SK1 de pequeña conductancia activado por Ca2+, un canal independiente del voltaje que acopla la dinámica intracelular de Ca2+ con la hiperpolarización de la membrana. Al modular la poshiperpolarización y los microdominios de señalización de Ca2+, SK1 influye en la excitabilidad neuronal, la integración sináptica y el acoplamiento estímulo-secreción en células excitables. La actividad de KCNN1 se cruza con procesos dependientes de Ca2+/calmodulina que regulan los patrones de disparo, la plasticidad y las respuestas transcripcionales posteriores. Las alteraciones en la función y la expresión de los canales SK se han investigado en el contexto de la desregulación neurofisiológica y fenotipos relevantes para enfermedades, lo que respalda su utilidad para estudios mecanísticos de vías asociadas a la excitabilidad.

SK1 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de KCNN1 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SK1 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus KCNN1 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional KCNN1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SK1. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo KCNN1 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SK1 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SK1 en células tumorales con expresión de KCNN1 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.