Six2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h): sc-402975

Übersicht

SIX2 kodiert Six2, einen Homeobox-Transkriptionsfaktor, der die Identität von Vorläuferzellen und die Organogenese reguliert, indem er die Festlegung von Zelllinien sowie Programme der epithelial–mesenchymalen Signalübertragung steuert. In der menschlichen Entwicklung ist Six2 vor allem dafür bekannt, Nephron-Vorläuferzellen aufrechtzuerhalten und zusammen mit anderen Regulatoren der Nierenentwicklung transkriptionelle Netzwerke zu modulieren, wodurch der Zeitpunkt der Differenzierung und die Gewebemusterbildung beeinflusst werden. Eine fehlregulierte SIX2-Expression oder eine veränderte Six2-Aktivität wurde mit angeborenen Fehlbildungen und tumorassoziierter transkriptioneller Reprogrammierung in Verbindung gebracht, bei der Entwicklungsprogramme zweckentfremdet werden, um verändertes Wachstum und Invasivität zu unterstützen. Als nukleäres DNA-bindendes Protein bietet Six2 einen mechanistischen Ansatzpunkt zur Untersuchung genregulatorischer Schaltkreise, der Dynamik von Chromatinzuständen und des Zusammenspiels entwicklungsbiologischer Signalwege.

Das Six2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des SIX2-Gens in human-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des SIX2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von SIX2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die Six2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von SIX2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der Six2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf SIX2-Exone abzielen, die für die Six2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere SIX2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom Six2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h) und vom Six2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (h2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des SIX2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das Six2 HDR-Plasmid (h) und Six2 HDR-Plasmid (h2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von SIX2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten SIX2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.