Plásmido CRISPR de Activación (m) Six2: sc-422957-ACT

Six2 (homólogo 2 de homeobox sine oculis) es un factor de transcripción homeobox que regula el mantenimiento de las células progenitoras y la especificación de linajes durante la organogénesis en el ratón, con funciones bien definidas en la autorrenovación de los progenitores de nefrona y en la morfogénesis por ramificación en el riñón en desarrollo. Al controlar programas transcripcionales vinculados a la señalización epitelio-mesenquimatosa y a la diferenciación, SIX2 influye en vías que regulan las decisiones de destino celular, la proliferación y el patrón tisular. La expresión alterada de Six2 o la desregulación de redes transcripcionales de la familia SIX se ha asociado con malformaciones congénitas renales y trastornos del desarrollo, lo que lo convierte en un objetivo útil para estudiar circuitos de regulación génica en tejidos embrionarios. Además, Six2 se utiliza ampliamente como marcador y como nodo funcional en la biología de células madre/progenitoras y en modelos del desarrollo renal.

Six2 El plásmido de activación CRISPR (m) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de Six2 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

Six2 El plásmido de activación CRISPR (m) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus Six2 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional Six2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de Six2. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo Six2 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de Six2 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía Six2 en células tumorales con expresión de Six2 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.