Plásmido CRISPR de Activación (h) SIRT7: sc-401401-ACT

SIRT7 es una desacetilasa nuclear dependiente de NAD+ de la familia de las sirtuinas que regula la organización de la cromatina, la transcripción del ADN ribosómico y la biogénesis de ribosomas impulsada por la ARN polimerasa I. Al modular sustratos histónicos y no histónicos, SIRT7 vincula el control epigenético con las respuestas celulares al estrés, la homeostasis metabólica y el mantenimiento de la integridad del genoma, incluidas las vías de respuesta al daño del ADN y al estrés replicativo. La actividad alterada de SIRT7 se ha asociado con una proliferación desregulada, la proteostasis y la función mitocondrial, lo que la hace relevante para estudios de señalización oncogénica, fenotipos relacionados con el envejecimiento y disfunción inflamatoria o metabólica. Por ello, la SIRT7 humana se utiliza ampliamente como un nodo para investigar programas transcripcionales que acoplan la función nucleolar con el control del ciclo celular y la adaptación al estrés.

SIRT7 El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SIRT7 sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SIRT7 El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SIRT7 en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SIRT7, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SIRT7. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SIRT7 y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SIRT7 en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SIRT7 en células tumorales con expresión de SIRT7 silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.