Plásmido Doble Nickase (h) SIRT5: sc-416994-NIC

SIRT5 codifica una desacetilasa/desacilasa mitocondrial dependiente de NAD+ que elimina de forma preferente las modificaciones de lisina succiniladas, maloniladas y glutariladas, ajustando así la actividad enzimática en el metabolismo central. Al regular rutas como el ciclo de la urea, la oxidación de ácidos grasos y la fosforilación oxidativa, SIRT5 ayuda a mantener la homeostasis mitocondrial y el equilibrio redox frente a fluctuaciones de nutrientes y estrés. La alteración de la actividad de SIRT5 se ha relacionado con la reprogramación metabólica, las respuestas al estrés oxidativo y la disfunción mitocondrial observadas en contextos de investigación oncológica y cardiometabólica. Como regulador postraduccional de proteínas mitocondriales, SIRT5 se estudia con frecuencia por su impacto en los estados de acilación del proteoma y en las redes de señalización aguas abajo que acoplan el estado energético a la adaptación celular.

SIRT5 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SIRT5 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SIRT5. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SIRT5. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SIRT5 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.