Plásmido Doble Nickase (h) SIRT3: sc-400675-NIC

SIRT3 codifica una desacetilasa mitocondrial dependiente de NAD⁺ que regula la acetilación de proteínas para coordinar el metabolismo oxidativo, el equilibrio redox y el control de calidad mitocondrial. Al desacetilar dianas implicadas en el ciclo del TCA (ciclo del ácido tricarboxílico), la β-oxidación de ácidos grasos y la defensa antioxidante, SIRT3 influye en la producción de ATP, el manejo de especies reactivas de oxígeno y las vías de adaptación al estrés. La actividad de SIRT3 se interseca con programas de detección de nutrientes y de homeostasis mitocondrial, incluidos el remodelado metabólico vinculado a AMPK y PGC-1α y procesos asociados a la mitofagia. La desacetilación dependiente de SIRT3 desregulada se ha asociado con alteraciones de la función mitocondrial observadas en trastornos metabólicos, neurodegeneración, respuestas cardiovasculares al estrés y reprogramación metabólica relacionada con el cáncer, lo que respalda su amplia relevancia en la biología de las enfermedades.

SIRT3 El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SIRT3 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SIRT3. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SIRT3. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.

Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SIRT3 alterado.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.