Partículas Lentivirales de Activación (m) SIRT1: sc-430046-LAC

El gen Sirt1 de ratón codifica la desacetilasa dependiente de NAD⁺ SIRT1, un regulador asociado a la cromatina que acopla el estado energético celular a programas transcripcionales y epigenéticos. SIRT1 modula las respuestas al estrés, la biogénesis mitocondrial y la adaptación metabólica al desacetilar dianas como p53, los factores de transcripción FOXO, NF-κB y PGC-1α, influyendo en vías de apoptosis, inflamación y estrés oxidativo. Mediante el diálogo cruzado con la señalización AMPK–mTOR, la regulación circadiana y las redes de reparación del daño del ADN, SIRT1 determina decisiones sobre el destino celular en múltiples tejidos. La actividad y la expresión desreguladas de SIRT1 se han vinculado con disfunción metabólica, fenotipos de estrés relevantes para la neurodegeneración, procesos asociados al envejecimiento y contextos de biología tumoral, lo que respalda su estudio en diversos sistemas de modelos murinos.

Las partículas de activación lentiviral SIRT1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Sirt1 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SIRT1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Sirt1, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SIRT1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Sirt1 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.