SIRT1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (m): sc-430046-ACT

O gene **Sirt1** de camundongo codifica a **SIRT1**, uma desacetilase proteica dependente de **NAD⁺** que conecta o estado energético celular à regulação transcricional e da cromatina. A SIRT1 modula respostas ao estresse, biogênese mitocondrial e metabolismo ao desacetilar reguladores-chave como **PGC-1α**, fatores **FOXO**, **NF-κB** e **p53**, influenciando assim o controle do estresse oxidativo, a inflamação e programas de sobrevivência celular. Por meio dessas atividades, a SIRT1 integra vias de detecção de nutrientes e mecanismos de controle epigenético que moldam a diferenciação e a fisiologia do organismo. A desregulação da sinalização de SIRT1 tem sido implicada em modelos de disfunção metabólica, neurodegeneração, inflamação e fenótipos relacionados ao câncer, tornando-a um alvo amplamente utilizado em estudos mecanísticos de regulação gênica.

SIRT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de Sirt1 sem alterar a sequência de ADN subjacente.

SIRT1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (m) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus Sirt1 em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição Sirt1, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de SIRT1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus Sirt1 nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de SIRT1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via SIRT1 em células tumorais com expressão de Sirt1 silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.