SIMPL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-425749
- Especies Diana: mouse
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- SIMPL El plásmido CRISPR/Cas9 Knockout (KO) (m) es un conjunto de plásmidos, cada uno de los cuales codifica la nucleasa Cas9 y un ARN guía (gRNA) de 20 nt específico para el objetivo, diseñado para lograr la máxima eficiencia de knockout utilizando secuencias derivadas de la biblioteca GeCKO v2
- Las secuencias de gRNA dirigen a Cas9 para que induzca roturas de doble cadena (DSB) específicas en el locus genómico SIMPL, lo que da lugar a la inactivación del gen mediante unión de extremos no homólogos (NHEJ)
- Los genes de resistencia a la puromicina y RFP están flanqueados por sitios LoxP, lo que permite la eliminación de los marcadores de selección mediante la recombinasa Cre (Vector Cre: sc-418923) tras el establecimiento de líneas celulares knockout estables
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
SIMPL Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m) | sc-425749 | 20 µg | $397.00 |
Descripción general
Irak1bp1 codifica SIMPL (molécula de señalización que interactúa con una quinasa tipo Pelle), un adaptador citosólico implicado en la señalización de los receptores tipo Toll y del receptor de IL-1 aguas abajo de IRAK1. SIMPL se ha asociado con la modulación de programas transcripcionales dependientes de NF-κB que determinan la activación de la inmunidad innata, la expresión de genes inflamatorios y las respuestas celulares al estrés. En sistemas murinos, la alteración de la señalización asociada a SIMPL puede influir en vías impulsadas por citocinas relevantes para la inflamación crónica y fenotipos de desregulación inmunitaria. Estas propiedades hacen de Irak1bp1 una diana útil para analizar la dinámica de la señalización de NF-κB dependiente del estímulo y su interrelación con otras vías inflamatorias en modelos celulares mieloides y del estroma.
El plásmido CRISPR/Cas9 KO SIMPL (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Irak1bp1 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Irak1bp1 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.
El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Irak1bp1 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína SIMPL.
Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Irak1bp1 para la investigación de la señalización de SIMPL, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.
Características principales
- sgRNA dirigidos a los exones de Irak1bp1 críticos para la función de SIMPL
Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Irak1bp1 para mejorar la eficiencia del knockout
Compatible con la administración mediante transfección
Variantes de diseño
CRISPRs +/- HDRs
- Los gRNA codificados por el plásmido SIMPL CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido SIMPL CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Irak1bp1. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR SIMPL (m) y el plásmido HDR SIMPL (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Irak1bp1 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Irak1bp1 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.