Partículas Lentivirales de Activación (h) SIK2: sc-406982-LAC

SIK2 (quinasa inducible por sal 2) es una quinasa de serina/treonina de la familia de quinasas relacionadas con AMPK que integra señales metabólicas y de estrés para coordinar programas transcripcionales y del citoesqueleto. Modula la señalización CREB/CRTC mediante el control, dependiente de la fosforilación, de los coactivadores CRTC, vinculando la señalización por AMPc con la expresión génica en procesos como el metabolismo de la glucosa y los lípidos, la función de los adipocitos y la progresión del ciclo celular. SIK2 también se ha implicado en la regulación del centrosoma y el control mitótico, conectando la señalización por quinasas con la proliferación y la aptitud celular. La actividad y la expresión desreguladas de SIK2 se han asociado con alteraciones de la homeostasis metabólica y con estados de señalización vinculados a tumores, lo que la convierte en un nodo útil para estudiar la regulación impulsada por quinasas en modelos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SIK2 (h) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de SIK2 en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SIK2 (h) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción SIK2, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SIK2. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo SIK2 y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.