SHISA2 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m): sc-432346

Übersicht

Shisa2 kodiert SHISA2, ein Single-Pass-Transmembranprotein aus der Shisa-Familie, das den Transport und die Reifung von Zelloberflächenrezeptoren modulieren kann und dadurch die Rezeptorverfügbarkeit sowie die nachgeschaltete Signalübertragung beeinflusst. In Maus-Zellen wurde SHISA2 mit der Regulation von Entwicklungs- und Differenzierungsprogrammen in Verbindung gebracht; beschrieben sind Funktionen bei der Steuerung der Reaktionsbereitschaft von WNT- und FGF-Signalwegen durch Effekte auf die Rezeptorprozessierung. Durch die Feinabstimmung der Intensität rezeptorvermittelter Signale kann SHISA2 epitheliale–mesenchymale Transitionen, die Gewebemorphogenese und die Stabilität von Zellzuständen beeinflussen. Eine fehlregulierte SHISA2-Expression oder -Funktion wurde in der Literatur mit veränderten Wachstumsfaktor-Signalnetzwerken assoziiert, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen relevant sind, die durch abnorme Differenzierung und eine Umprogrammierung der Signalübertragung gekennzeichnet sind.

Das SHISA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) ist ein Pool von Plasmiden, die für die gezielte Disruption des Shisa2-Gens in mouse-Zelllinien entwickelt wurden. Jedes Plasmid koexprimiert eine einzigartige Single-Guide-RNA (sgRNA), die auf eine bestimmte Stelle innerhalb des Shisa2-Gens abzielt, zusammen mit der Streptococcus pyogenes Cas9-Nuklease. Die Plasmide kodieren zudem für GFP, was die fluoreszente Identifizierung und Anreicherung erfolgreich transfizierter Zellen mittels Fluoreszenzmikroskopie oder Durchflusszytometrie ermöglicht.

Das Multi-Guide-Design erhöht die Wahrscheinlichkeit, dass Insertionen oder Deletionen (Indels) entstehen, die den offenen Leserahmen von Shisa2 nach der Cas9-vermittelten Bildung von Doppelstrangbrüchen unterbrechen. Durch das CRISPR/Cas9-System verursachte DNA-Brüche werden über endogene NHEJ-Wege (Non-Homologous End Joining) repariert, was häufig zu Frameshift-Mutationen führt, die die SHISA2-Proteinexpression aufheben.

Dieses CRISPR-Knockout-System ermöglicht die effiziente Erzeugung von Shisa2-defizienten Zellmodellen zur Untersuchung der SHISA2-Signalübertragung, für funktionelle Genomstudien, in der Krebsbiologieforschung sowie zur Bewertung therapeutischer Reaktionen in menschlichen Zelllinien.

Hauptmerkmale

• sgRNAs, die auf Shisa2-Exone abzielen, die für die SHISA2-Funktion entscheidend sind
  Ko-Expression von SpCas9 und sgRNA aus einem einzigen Plasmid zur vereinfachten Verabreichung
  GFP-Reporter zur Identifizierung transfizierter Zellen
  Pool von Plasmiden, die auf mehrere Shisa2-Genomstellen abzielen, um die Knockout-Effizienz zu verbessern
  Kompatibel mit der Verabreichung durch Transfektion

Designvarianten

CRISPRs +/- HDRs

• gRNAs, die vom SHISA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m) und vom SHISA2 CRISPR/Cas9-KO-Plasmid (m2) kodiert werden, zielen auf unterschiedliche Stellen innerhalb des Shisa2-Lokus ab. Es kann ein oder beide Targeting-Designs verfügbar sein. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.
  HDR-Donorkonstrukte, kodiert durch das SHISA2 HDR-Plasmid (m) und SHISA2 HDR-Plasmid (m2) kodiert, enthalten eine Puromycin-Resistenzkassette und einen RFP-Reporter, flankiert von Shisa2-Homologiearmen, um die homologe Reparatur an definierten Shisa2-Zielstellen entsprechend den CRISPR/Cas9-KO-Designs zu unterstützen. Die Verfügbarkeit von HDR-Donoren kann variieren. Siehe „Verwandte Produkte“ für Verfügbarkeit.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.