Plasmide CRISPR/Cas9 KO SHISA2 (h): sc-406895

Présentation

SHISA2 (membre 2 de la famille shisa) code une protéine transmembranaire à passage unique impliquée dans la régulation de la maturation et du trafic des récepteurs. Il a été rapporté qu’elle module la signalisation Wnt et FGF en contrôlant la disponibilité des récepteurs à la surface cellulaire. En influençant l’intensité des voies et les signaux spatiaux, SHISA2 peut affecter les programmes épithélio-mésenchymateux, la dynamique de l’adhésion cellulaire et la spécification des lignages au cours du développement et du remodelage tissulaire. Une expression altérée de SHISA2 a été observée dans plusieurs jeux de données transcriptomiques de cancers et a été associée à des modifications de l’invasivité et du potentiel métastatique, ce qui étaye son intérêt en tant que nœud mécanistique pour étudier la plasticité de la signalisation oncogénique. Des modèles in vitro ciblant SHISA2 permettent d’examiner les seuils de signalisation médiée par les récepteurs, le dialogue entre voies dépendant du contexte et les états transcriptionnels en aval pertinents pour la biologie de la progression tumorale.

Le plasmide CRISPR/Cas9 KO SHISA2 (h) est un ensemble de plasmides conçus pour la disruption ciblée du gène SHISA2 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide co-exprime un ARN guide unique (sgRNA) ciblant un site distinct au sein du SHISA2, ainsi que la nucléase Cas9 de Streptococcus pyogenes. Les plasmides codent également pour la GFP, ce qui permet l'identification par fluorescence et l'enrichissement des cellules transfectées avec succès par microscopie à fluorescence ou cytométrie en flux.

La conception multi-guide augmente la probabilité de générer des insertions ou des délétions (indels) qui perturbent le cadre de lecture ouvert SHISA2 à la suite de la formation de cassures double brin médiées par Cas9. Les cassures d'ADN introduites par le système CRISPR/Cas9 sont réparées par des voies endogènes de jonction non homologue (NHEJ), ce qui entraîne fréquemment des mutations par décalage du cadre de lecture qui suppriment l'expression de la protéine SHISA2.

Ce système de knock-out CRISPR permet la génération efficace de modèles cellulaires déficients en SHISA2 pour l'étude de la signalisation de SHISA2, les études de génomique fonctionnelle, la recherche en biologie du cancer et l'évaluation des réponses thérapeutiques dans des lignées cellulaires humaines.

Caractéristiques principales

• sgRNA ciblant le ou les exons de SHISA2 essentiels à la fonction de SHISA2
  Co-expression de SpCas9 et de sgRNA à partir d'un seul plasmide pour une administration simplifiée
  Rapporteur GFP pour l'identification des cellules transfectées
  Pool de plasmides ciblant plusieurs sites génomiques de SHISA2 pour améliorer l'efficacité du knock-out
  Compatible avec l'administration par transfection

Variantes de conception

CRISPR +/- HDR

• Les gRNA codés par le SHISA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h) et le SHISA2 plasmide CRISPR/Cas9 KO (h2) ciblent des sites distincts au sein du locus SHISA2. Une ou les deux conceptions de ciblage peuvent être disponibles. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.
  Les constructions donneuses HDR codées par le SHISA2 plasmide HDR (h) et le SHISA2 (h2) contiennent une cassette de résistance à la puromycine et un rapporteur RFP flanqué de bras d'homologie SHISA2 pour permettre la réparation dirigée par homologie au niveau de sites cibles SHISA2 définis correspondant aux conceptions CRISPR/Cas9 KO. La disponibilité des donneurs HDR peut varier. Voir les produits associés pour connaître la disponibilité.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.