Partículas Lentivirales de Activación (m) SHIP-1: sc-421137-LAC

Inpp5d codifica SHIP-1 (fosfatasa de inositol 5 que contiene dominio SH2 1), un regulador negativo de la señalización de fosfoinosítidos enriquecido en el compartimento hematopoyético, que hidroliza PI(3,4,5)P3 a PI(3,4)P2 y atenúa la salida de la vía PI3K–AKT. En linajes inmunitarios de ratón, SHIP-1 ayuda a ajustar la señalización aguas abajo de receptores como los receptores Fc, los receptores de citocinas y las vías BCR/TLR, modulando los umbrales de activación mieloide y linfoide. Mediante el crosstalk con la señalización MAPK, reguladores de la apoptosis y programas del citoesqueleto, influye en la proliferación, la supervivencia, la migración y la producción de mediadores inflamatorios. La actividad desregulada de Inpp5d/SHIP-1 se estudia ampliamente en la disfunción inmunitaria y en fenotipos asociados a la inflamación, lo que la hace relevante para trabajos mecanísticos en modelos de macrófagos, microglía, células B y mastocitos.

Las partículas de activación lentiviral SHIP-1 (m) responden a esta necesidad al empaquetar el sistema completo de activación transcripcional del mediador de activación sinérgica (SAM) en partículas lentivirales de alto título listas para la transducción, lo que permite una regulación al alza eficiente de Inpp5d en una gama más amplia de tipos de células humanas.

Las partículas de activación lentiviral SHIP-1 (m) suministran todos los componentes funcionales del sistema mediador de activación sinérgica (SAM) a través de la transducción lentiviral. El sistema comprende tres preparaciones de partículas cotransducidas en las células diana: una que codifica dCas9 catalíticamente inactivo (mutaciones D10A y N863A) fusionado al dominio de transactivación VP64 con un gen de resistencia a la blasticidina; otra que codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1 con un gen de resistencia a la higromicina; y otra que codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 con un gen de resistencia a la puromicina. Tras la transducción lentiviral y la integración genómica de los casetes de expresión, los componentes del SAM se expresan de forma estable y se ensamblan en el locus diana dentro de la región promotora proximal, aguas arriba del sitio de inicio de la transcripción Inpp5d, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma cooperativa para reclutar la maquinaria transcripcional endógena e impulsar la regulación al alza sostenida de la expresión endógena de SHIP-1. El uso de dCas9 inactivo frente a nucleasas evita la introducción de roturas de ADN de doble cadena y preserva el locus genómico nativo Inpp5d y la arquitectura reguladora.

El formato lentiviral ofrece varias ventajas prácticas: la integración genómica estable permite la activación hereditaria a lo largo de las divisiones celulares; las preparaciones de partículas de alto título eliminan la necesidad de producir el virus internamente; y la compatibilidad con tipos de células primarias, no divisibles y resistentes a la transfección amplía la accesibilidad experimental. La transducción exitosa puede confirmarse y enriquecerse mediante selección con triple antibiótico utilizando puromicina, higromicina y blasticidina.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.