SHARPIN Lentiviral Activation Particles (h): sc-404836-LAC

SHARPIN (SHANK-assoziierter RH-Domänen-Interaktionspartner) ist ein zentraler Bestandteil des linearen Ubiquitin-Ketten-Assemblierungskomplexes (LUBAC), in dem es mit RNF31/HOIP und RBCK1/HOIL-1L zusammenarbeitet, um Met1-verknüpfte Ubiquitinierung und die nachgeschaltete NF-κB-Signalübertragung zu regulieren. Durch die Kontrolle ubiquitinabhängiger Signalwege an Rezeptoren wie TNFR und in Pattern-Recognition-Signalwegen trägt SHARPIN dazu bei, Entzündungsantworten, Programme zum Zellüberleben und die Proteostase fein abzustimmen. SHARPIN wurde zudem mit der Modulation der PTEN/PI3K–AKT-Signalgebung sowie mit zytoskelettalen bzw. adhäsionsassoziierten Prozessen in Verbindung gebracht, was es mit Proliferation, Migration und Stressantwort-Phänotypen verknüpft. Eine fehlregulierte SHARPIN-Aktivität wird daher in Kontexten wie chronischer Entzündung, Defekten der Immun-Signalgebung und der krebsassoziierten Umverdrahtung von Signalwegen untersucht.

SHARPIN Lentivirale Aktivierungspartikel (h) erfüllen diesen Bedarf, indem sie das vollständige Transkriptionsaktivierungssystem des Synergistic Activation Mediator (SAM) in transduktionsbereite, hoch-titrige lentivirale Partikel verpacken und so eine effiziente SHARPIN-Hochregulation über ein breiteres Spektrum menschlicher Zelltypen ermöglichen.

SHARPIN Lentivirale Aktivierungspartikel (h) liefern alle funktionellen Komponenten des Synergistic Activation Mediator (SAM)-Systems über lentivirale Transduktion. Das System umfasst drei Partikelpräparate, die gemeinsam in Zielzellen transduziert werden: eines, das für katalytisch inaktives dCas9 (Mutationen D10A und N863A) kodiert, das mit der VP64-Transaktivierungsdomäne und einem Blasticidin-Resistenzgen fusioniert ist; eines, das für das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein mit einem Hygromycin-Resistenzgen kodiert; und eines, das für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA kodiert, die an zwei MS2-RNA-Aptamere mit einem Puromycin-Resistenzgen fusioniert ist. Nach der lentiviralen Transduktion und der genomischen Integration der Expressionskassetten werden die SAM-Komponenten stabil exprimiert und lagern sich am Zielort innerhalb der proximalen Promotorregion stromaufwärts der SHARPIN-Transkriptionsstartstelle an, wo VP64, p65 und HSF1 kooperativ wirken, um endogene Transkriptionsmaschinerie zu rekrutieren und eine anhaltende Hochregulation der endogenen SHARPIN-Expression zu bewirken. Die Verwendung von nuklease-inaktivem dCas9 verhindert die Einführung von Doppelstrangbrüchen in der DNA und bewahrt den nativen SHARPIN-Genomlokus sowie die regulatorische Architektur.

Das lentivirale Format bietet mehrere praktische Vorteile: Die stabile genomische Integration unterstützt eine vererbbare Aktivierung über Zellteilungen hinweg; Partikelpräparate mit hohem Titer machen eine eigene Virusproduktion überflüssig; und die Kompatibilität mit primären, sich nicht teilenden und transfektionsresistenten Zelltypen erweitert die experimentellen Möglichkeiten. Eine erfolgreiche Transduktion kann durch eine dreifache Antibiotika-Selektion mit Puromycin, Hygromycin und Blasticidin bestätigt und verstärkt werden.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.