Shank2 Plásmido CRISPR/Cas9 KO (m): sc-431686

Descripción general

Shank2 codifica la proteína 2 con dominios SH3 y múltiples repeticiones de anquirina (SHANK2), un andamiaje de la densidad postsináptica que organiza las sinapsis glutamatérgicas al vincular receptores ionotrópicos y complejos de adhesión con la señalización downstream y el citoesqueleto de actina. En neuronas, SHANK2 ayuda a coordinar la maduración sináptica, la morfogénesis de espinas y el remodelado dependiente de la actividad mediante interacciones con proteínas de la familia PSD-95, complejos Homer–mGluR y vías reguladoras de la actina. La alteración del andamiaje dependiente de Shank2 puede modificar la transmisión sináptica excitatoria y la homeostasis de las sinapsis, por lo que es un nodo estudiado con frecuencia en programas de conectividad neuronal y plasticidad. Estudios genéticos y funcionales han asociado la perturbación de SHANK2 con fenotipos del neurodesarrollo, lo que respalda su relevancia para modelar mecanismos de disfunción sináptica in vivo y en neuronas de ratón cultivadas.

El plásmido CRISPR/Cas9 KO Shank2 (m) es un conjunto de plásmidos diseñado para la interrupción dirigida del gen Shank2 en líneas celulares mouse. Cada plásmido coexpresa un ARN guía único (sgRNA) dirigido a un sitio distinto dentro del Shank2 junto con la nucleasa Cas9 de Streptococcus pyogenes. Los plásmidos también codifican GFP, lo que permite la identificación fluorescente y el enriquecimiento de las células transfectadas con éxito mediante microscopía de fluorescencia o citometría de flujo.

El diseño multiguía aumenta la probabilidad de generar inserciones o deleciones (indeles) que interrumpan el marco de lectura abierto de Shank2 tras la formación de roturas de doble cadena mediadas por Cas9. Las roturas de ADN introducidas por el sistema CRISPR/Cas9 se reparan a través de vías endógenas de unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que con frecuencia da lugar a mutaciones de desplazamiento del marco de lectura que anulan la expresión de la proteína Shank2.

Este sistema de knockout CRISPR permite la generación eficiente de modelos celulares deficientes en Shank2 para la investigación de la señalización de Shank2, estudios de genómica funcional, investigación en biología del cáncer y evaluación de respuestas terapéuticas en líneas celulares humanas.

Características principales

• sgRNA dirigidos a los exones de Shank2 críticos para la función de Shank2
  Coexpresión de SpCas9 y sgRNA a partir de un único plásmido para simplificar la administración
  Reportero GFP para la identificación de células transfectadas
  Conjunto de plásmidos dirigidos a múltiples sitios genómicos de Shank2 para mejorar la eficiencia del knockout
  Compatible con la administración mediante transfección

Variantes de diseño

CRISPRs +/- HDRs

• Los gRNA codificados por el plásmido Shank2 CRISPR/Cas9 KO (m) y el plásmido Shank2 CRISPR/Cas9 KO (m2) se dirigen a sitios distintos dentro del locus Shank2. Puede estar disponible uno o ambos diseños de orientación. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.
  Las construcciones donantes HDR codificadas por el plásmido HDR Shank2 (m) y el plásmido HDR Shank2 (m2) contienen un casete de resistencia a la puromicina y un reportero RFP flanqueado por brazos de homología Shank2 para facilitar la reparación dirigida por homología en sitios diana Shank2 definidos que se corresponden con los diseños de KO de CRISPR/Cas9. La disponibilidad de los donantes HDR puede variar. Consulte «Productos relacionados» para conocer la disponibilidad.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.