Plásmido Doble Nickase (h) SH2D1A: sc-404747-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SH2D1A consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SH2D1A (h) y el plásmido de doble nickasa SH2D1A (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a SH2D1A. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SH2D1A Anticuerpo (A-8): sc-398118
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SH2D1A | sc-404747-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plásmido Doble Nickase (h2) SH2D1A | sc-404747-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
SH2D1A codifica una proteína adaptadora que contiene un dominio SH2 (SAP), la cual acopla los receptores de la familia SLAM a la señalización aguas abajo en células T y células NK, moldeando la función citotóxica, la producción de citocinas y la cooperación entre linfocitos. Al modular las interacciones con quinasas y fosfatasas inhibitorias, SH2D1A influye en la formación de la sinapsis inmunológica y en los umbrales de señalización que gobiernan las respuestas inmunes antivirales y humorales. La alteración de SH2D1A desorganiza las vías mediadas por SLAM que controlan la actividad de los linfocitos citotóxicos y la ayuda a las células B, lo que conduce a desregulación inmunitaria. Las variantes con pérdida de función se asocian a la enfermedad linfoproliferativa ligada al cromosoma X tipo 1, con susceptibilidad a inmunopatología grave asociada a EBV y a defectos más amplios en la homeostasis inmunitaria.
SH2D1A El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus SH2D1A en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de SH2D1A. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de SH2D1A. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con SH2D1A alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.