Plasmide Double Nickase (h) SH-PTP2: sc-400260-NIC
- Espèces cibles: human
- 20 µg d'ADN plasmidique purifié et prêt à transfecter; Jusqu'à 20 transfections
- Le Plasmide Double Nickase (h) SH-PTP2 correspond à une paire de plasmides chacun codant la nucléase Cas9 mutante D10A et un ARN guide (gARN) cible de 20 nt specifique, élaboré pour le knockout optimal de l'expression d'un gène avec une plus grande spécificité que le plasmide KO CRISPR/Cas9 correspondant.
- Les séquences des paires d'ARNg sont décalées de 20 pb environ pour induire avec la Cas9 une double entaille spécifique de l'ADN génomique, qui imite un DSB
- L'un des plasmides de la paire contient un gène de résistance à la puromycine; l'autre plasmide de la paire contient un marqueur GFP pour confirmer visuellement la transfection
- Le plasmide SH-PTP2 Double Nickase (h) et le plasmide SH-PTP2 Double Nickase (h2) codent pour des paires distinctes de gRNA ciblant PTPN11. Un ou les deux modèles peuvent être disponibles
- Après transfection, l'efficacité de knockout de gène peut être évaluée par WB, IF ou IHC en utilisant l'anticorps: SH-PTP2 Antibody (B-1): sc-7384
Informations pour la commande
| Nom du produit | Ref. Catalogue | COND. | Prix HT | QTÉ | Favoris | |
Plasmide Double Nickase (h) SH-PTP2 | sc-400260-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Plasmide Double Nickase (h2) SH-PTP2 | sc-400260-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
PTPN11 code SH-PTP2 (SHP2), une phosphatase cytosolique des tyrosines phosphorylées qui relaie les signaux issus des récepteurs à activité tyrosine kinase activés et des récepteurs de cytokines vers les voies en aval RAS–MAPK/ERK et PI3K–AKT. Grâce à ses domaines SH2 et à son domaine catalytique PTP, SHP2 module des interactions protéiques dépendantes de la phosphorylation qui contrôlent la prolifération, la différenciation, la migration et la survie. La fonction de PTPN11 est également liée à la dynamique de la signalisation JAK/STAT ainsi qu’à la régulation par rétroaction au sein des réseaux de signalisation des facteurs de croissance. Une activité PTPN11 dérégulée ou des mutations ont été associées à des syndromes du développement et à divers contextes de signalisation oncogénique, ce qui en fait un nœud largement étudié dans la reconfiguration des voies et la recherche sur la transduction du signal.
SH-PTP2 Le plasmide double nickase (h) se compose d'une paire de plasmides appariés, conçus pour une édition hautement spécifique du locus PTPN11 dans les lignées cellulaires human. Chaque plasmide exprime une nickase Cas9 D10A et un sgRNA distinct ciblant des brins d'ADN opposés au sein de PTPN11. Lorsqu'elles sont dirigées vers des sites adjacents sur des brins d'ADN opposés, les deux nickases génèrent des cassures simple brin décalées qui, ensemble, produisent une cassure double brin décalée, nécessitant une activité coordonnée sur la cible de la part des deux guides. La cassure d'ADN qui en résulte est résolue par les voies de réparation cellulaires endogènes, le plus souvent par jonction non homologue (NHEJ), ce qui conduit à des insertions ou des délétions qui perturbent la fonction de PTPN11. En nécessitant l'engagement de deux ARNsg au locus cible, l'approche par double nick améliore la spécificité de l'édition et offre une stratégie CRISPR complémentaire pour les applications où un contrôle supplémentaire de la précision du ciblage est souhaité.
Afin de faciliter l'identification efficace des cellules éditées, un plasmide code pour la GFP permettant la visualisation par fluorescence des populations transfectées, tandis que le plasmide compagnon porte un gène de résistance à la puromycine pour la sélection antibiotique. Ensemble, ces caractéristiques favorisent l'enrichissement efficace des populations co-transfectées et simplifient la validation des clones présentant une perturbation de PTPN11.
Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.