Plásmido CRISPR de Activación (h) SGTA: sc-404399-ACT

La SGTA humana (proteína alfa pequeña rica en glutamina que contiene repeticiones tetratricopeptídicas) es una cochaperona que se une a HSP70/HSC70 y HSP90 para coordinar el control de calidad proteico y el manejo de proteínas cliente. SGTA participa en la clasificación (“triaje”) de polipéptidos hidrofóbicos y de proteínas de membrana ancladas por cola, influyendo en su entrega a vías de inserción en membrana o a la degradación proteasomal, y se integra funcionalmente con el eje de direccionamiento BAG6/GET. A través de estas interacciones, SGTA ayuda a mantener la proteostasis, modula la maduración de receptores y proteínas de señalización, e impacta respuestas celulares al estrés como la degradación asociada al retículo endoplásmico (ERAD). La desregulación de redes de chaperonas que incluyen SGTA se ha asociado con alteraciones de la homeostasis proteica en contextos relevantes para la biología del cáncer y la neurodegeneración, lo que respalda su valor como nodo mecanístico para la investigación de vías.

SGTA El plásmido de activación CRISPR (h) proporciona un enfoque específico y no destructivo para regular al alza la expresión endógena de SGTA sin alterar la secuencia de ADN subyacente.

SGTA El plásmido de activación CRISPR (h) es un sistema mediador de activación sinérgica (SAM) de tres plásmidos diseñado para la regulación al alza transcripcional altamente eficiente y específica del locus SGTA en líneas celulares humanas. El sistema se basa en una Cas9 catalíticamente inactiva (dCas9) que porta dos mutaciones inactivadoras (D10A y N863A) que eliminan la actividad nucleasa al tiempo que conservan la unión al ADN. Esta dCas9 se fusiona con VP64, un potente activador transcripcional, y se coexpresa con un gen de resistencia a la blasticidina para la selección. El segundo plásmido codifica la proteína de fusión MS2-p65-HSF1, un complejo activador secundario que actúa en conjunto con dCas9-VP64, junto con un gen de resistencia a la higromicina. El tercer plásmido codifica un ARN guía (sgRNA) específico del objetivo de 20 nt fusionado a dos aptámeros de ARN MS2 que reclutan el complejo MS2-p65-HSF1 al sitio de activación, acompañado de un gen de resistencia a la puromicina. Los tres plásmidos se administran en una proporción de masa de 1:1:1 para una expresión equilibrada de todos los componentes del sistema.

Una vez ensamblado en el locus diana, el complejo SAM se une aproximadamente 200 pb aguas arriba del sitio de inicio transcripcional SGTA, donde VP64, p65 y HSF1 actúan de forma coordinada para reclutar la maquinaria transcripcional e impulsar la regulación al alza de la expresión endógena de SGTA. A diferencia de la Cas9 con actividad nucleasa, dCas9 no introduce roturas de doble cadena ni modifica la secuencia genómica, preservando el locus nativo SGTA y permitiendo el estudio de las respuestas transcripcionales dependientes de SGTA en el locus endógeno, lo que la convierte en una herramienta valiosa para estudios funcionales, la identificación de genes diana y la modelización de la restauración de la vía SGTA en células tumorales con expresión de SGTA silenciada o reducida.

Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.