Plasmide CRISPR d'Activation (h) SgK269: sc-403322-ACT

PEAK1 (également connu sous le nom de SgK269) code une pseudokinase associée au cytosquelette qui agit comme une protéine d’échafaudage intégrant les signaux issus des récepteurs à activité tyrosine kinase et de l’adhérence médiée par les intégrines. Elle régule la dynamique des adhésions focales, le remodelage de l’actine et la motilité cellulaire via des interactions qui influencent la signalisation SRC/FAK et des voies en aval telles que MAPK/ERK et PI3K/AKT. PEAK1 contribue à des phénotypes invasifs en coordonnant des complexes de signalisation dépendants de la phosphorylation et en modulant des processus liés à la transition épithélio-mésenchymateuse. Des altérations de l’expression de PEAK1 et de l’engagement de ses voies ont été associées à la progression tumorale et au comportement métastatique dans de multiples contextes cancéreux, ce qui soutient son utilisation dans des études mécanistiques de l’adhérence et de la migration.

SgK269 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de PEAK1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

SgK269 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus PEAK1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription PEAK1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de SgK269. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus PEAK1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de SgK269 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie SgK269 dans les cellules tumorales présentant une expression de PEAK1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.