Plásmido Doble Nickase (h) SGEF: sc-409874-NIC
- Especies Diana: human
- 20 µg de plásmido de ADN purificado listo para la trasfección; suficiente para 20 transfecciones máximo
- El Plásmido Double Nickase (h)SGEF consisten en un par de plásmidos cada uno codificando una nucleasa Cas9 mutada D10A y una guia de ARN de 20 nucleótidos (gRNA) diseñados para una mayor especificidad que el homologo CRISPR/Cas9 KO
- Las secuencias de gRNA tienen una diferencia de unas 20 pb para permitir un corte doble mediado por Cas9 en el ADN que imita el doble corte
- Uno de los plásmidos contiene el gen de resistencia a puromicina para la selección y el otro el marcado GFP para confirmar visualmente la transfección
- El plásmido de doble nickasa SGEF (h) y el plásmido de doble nickasa SGEF (h2) codifican diseños distintos de pares de gRNA dirigidos a ARHGEF26. Puede que esté disponible uno o ambos diseños
- Tras la transfección, la eficacia del knockout puede comprobarse mediante WB, IF ó IHC utilzando el anticuerpo: SGEF Anticuerpo (E-5): sc-514048
Información sobre pedidos
| Nombre del producto | Número de catálogo | UNIDAD | Precio | CANTIDAD | Favoritos | |
Plásmido Doble Nickase (h) SGEF | sc-409874-NIC | 20 µg | $410.00 |
ARHGEF26 codifica SGEF, un factor de intercambio de nucleótidos de guanina (GEF) para Rho de la familia Dbl que activa GTPasas Rho, con funciones destacadas en la remodelación del citoesqueleto impulsada por RhoG y en el tráfico de membrana. Mediante la regulación de la dinámica de la actina, SGEF influye en la adhesión y migración celulares y en procesos endocíticos, conectando señales upstream con cambios coordinados en la forma y la polaridad celular. La señalización de Rho dependiente de ARHGEF26 se interconecta con vías que controlan las respuestas de células inflamatorias y el comportamiento de la barrera epitelial, lo que la hace relevante para estudios de señalización inmunitaria, interacciones hospedador–patógeno y remodelado tisular. La activación desregulada de GTPasas Rho y el control alterado del citoesqueleto se asocian con frecuencia a fenotipos oncogénicos y a un comportamiento celular invasivo, situando a SGEF como un nodo mecanístico para desentrañar la biología de enfermedades vinculadas a la motilidad.
SGEF El plásmido de doble nicasa (h) consiste en un par de plásmidos emparejados diseñados para la edición de alta especificidad del locus ARHGEF26 en líneas celulares human. Cada plásmido expresa una nicasa Cas9 D10A y un ARN guía específico (sgRNA) dirigido a cadenas de ADN opuestas dentro de ARHGEF26. Cuando se dirigen a sitios adyacentes en cadenas de ADN opuestas, las dos nicasas generan cortes en cadena simple desplazados que, juntos, producen una rotura de doble cadena escalonada, lo que requiere una actividad coordinada sobre el objetivo por parte de ambas guías. La rotura de ADN resultante se resuelve mediante vías de reparación celular endógenas, más comúnmente a través de la unión de extremos no homólogos (NHEJ), lo que da lugar a inserciones o deleciones que alteran la función de ARHGEF26. Al requerir la participación de dos ARN guía en el locus diana, el enfoque de doble corte mejora la especificidad de la edición y proporciona una estrategia CRISPR complementaria para aplicaciones en las que se desea un control adicional sobre la precisión de la orientación.
Para facilitar la identificación eficiente de las células editadas, un plásmido codifica GFP para la visualización fluorescente de las poblaciones transfectadas, mientras que el plásmido complementario lleva un gen de resistencia a la puromicina para la selección con antibióticos. En conjunto, estas características facilitan el enriquecimiento eficiente de las poblaciones cotransfectadas y simplifican la validación de los clones con ARHGEF26 alterado.
Sólo para uso en investigación. No destinado a uso diagnóstico o terapéutico.