Sg III CRISPR/Cas9 KOプラスミド (m): sc-422812

概要

セクレトグラニンIII（Scg3；Sg III）は、調節性分泌経路に多く存在するグラニンファミリーのタンパク質で、内分泌細胞および神経内分泌細胞において、分泌顆粒の生合成、カーゴの選別、ならびにペプチドホルモン／ニューロペプチドの梱包に寄与します。マウスでは、Sg IIIは有芯小胞（dense-core vesicle）の形成と調節性エキソサイトーシスに関与し、小胞輸送や刺激に連動した分泌プログラムに影響を及ぼします。グラニンネットワーク機能の変化は、神経内分泌シグナル伝達や代謝恒常性の破綻と関連づけられており、Scg3は分泌経路の構造理解や刺激依存的な放出ダイナミクスの研究に有用な標的です。Scg3を実験的に解析することで、小胞成熟の機構、プロホルモンのタンパク質分解処理、ストレス応答性の分泌リモデリングに関する機構研究が進みます。

Sg III CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）は、mouse細胞株におけるScg3遺伝子の標的破壊を目的として設計されたプラスミドのプールである。各プラスミドは、Scg3内の異なる部位を標的とする固有のシングルガイドRNA（sgRNA）と、Streptococcus pyogenes由来のCas9ヌクレアーゼを共発現します。また、これらのプラスミドはGFPをコードしており、蛍光顕微鏡やフローサイトメトリーを用いて、トランスフェクションに成功した細胞を蛍光で識別・濃縮することが可能です。

このマルチガイド設計により、Cas9による二本鎖切断の形成後に、Scg3のオープンリーディングフレームを破壊する挿入または欠失（インデル）が生じる可能性が高まります。CRISPR/Cas9システムによって導入されたDNA切断は、内因性の非相同末端結合（NHEJ）経路を通じて修復され、その結果、Sg IIIタンパク質の発現を阻害するフレームシフト変異が生じることが頻繁にあります。

このCRISPRノックアウトシステムにより、Sg IIIシグナル伝達、機能ゲノミクス研究、がん生物学研究、およびヒト細胞株における治療反応の評価を目的とした、Scg3欠損細胞モデルの効率的な作製が可能となる。

主な特徴

• Sg IIIの機能に不可欠なScg3エクソンを標的とするsgRNA
  導入を簡素化するための、単一プラスミドからのSpCas9およびsgRNAの共発現
  トランスフェクトされた細胞を識別するためのGFPレポーター
  ノックアウト効率を向上させるための、Scg3ゲノム上の複数の部位を標的とするプラスミドのプール
  トランスフェクションによる導入に対応

設計バリエーション

CRISPRs +/- HDR

• Sg III CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m）およびSg III CRISPR/Cas9 KOプラスミド（m2）によってコードされるgRNAは、Scg3遺伝子座内の異なる部位を標的としています。いずれか一方、または両方の標的設計が利用可能な場合があります。入手可能性については「関連製品」を参照してください。
  Sg III HDRプラスミド（m）および Sg III HDRプラスミド（m2）によってコードされるHDRドナー構築体は、プロマイシン耐性カセットとRFPレポーターを含み、これらはScg3ホモロジーアームに挟まれており、CRISPR/Cas9 KO設計に対応する特定のScg3標的部位でのホモロジー依存修復をサポートします。HDRドナーの入手可能性は異なる場合があります。入手可能性については「関連製品」をご確認ください。

研究用のみ。診断用または治療用ではありません。