SETD4 CRISPR Activation Plasmid (h): sc-403788-ACT

Humanes SETD4 kodiert ein SET-Domänen-haltiges Protein, das an der lysinmethylierungsabhängigen Regulation der Chromatinstruktur und transkriptioneller Programme beteiligt ist. Als mutmaßlicher epigenetischer „Writer“ wird SETD4 im Kontext von Chromatin-Remodeling, Zellzykluskontrolle und linienassoziierter Genexpression untersucht, wobei veränderte Methylierungsdynamiken den zellulären Zustand umgestalten können. Eine Fehlregulation der SETD4-Expression oder -Aktivität wurde im Zusammenhang mit Proliferationsphänotypen und transkriptioneller Reprogrammierung untersucht, die für die Krebsbiologie und andere Erkrankungen mit epigenetischen Störungen relevant sind. Diese Eigenschaften machen SETD4 zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien, die chromatinassoziierte Signalprozesse mit Genregulationsnetzwerken verknüpfen.

SETD4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) bietet einen gezielten, nicht-destruktiven Ansatz zur Hochregulierung der endogenen SETD4-Expression, ohne die zugrunde liegende DNA-Sequenz zu verändern.

SETD4 Das CRISPR-Aktivierungsplasmid (h) ist ein aus drei Plasmiden bestehendes synergistisches Aktivierungsmediator-System (SAM), das für eine hocheffiziente, ortsspezifische transkriptionelle Hochregulation des SETD4-Lokus in menschlichen Zelllinien entwickelt wurde. Das System basiert auf einem katalytisch inaktiven Cas9 (dCas9), das zwei inaktivierende Mutationen (D10A und N863A) trägt, welche die Nukleaseaktivität eliminieren, während die DNA-Bindung erhalten bleibt. Dieses dCas9 ist mit VP64, einem potenten Transkriptionsaktivator, fusioniert und wird zusammen mit einem Blasticidin-Resistenzgen zur Selektion koexprimiert. Das zweite Plasmid kodiert das MS2-p65-HSF1-Fusionsprotein, einen sekundären Aktivatorkomplex, der zusammen mit dCas9-VP64 wirkt, sowie ein Hygromycin-Resistenzgen. Das dritte Plasmid kodiert für eine zielspezifische 20-nt-sgRNA, die an zwei MS2-RNA-Aptamere fusioniert ist, welche den MS2-p65-HSF1-Komplex an die Aktivierungsstelle rekrutieren, begleitet von einem Puromycin-Resistenzgen. Die drei Plasmide werden im Massenverhältnis 1:1:1 verabreicht, um eine ausgewogene Expression aller Systemkomponenten zu gewährleisten.

Nach der Assemblierung am Zielort bindet der SAM-Komplex etwa 200 bp stromaufwärts der SETD4-Transkriptionsstartstelle, wo VP64, p65 und HSF1 gemeinsam die Transkriptionsmaschinerie rekrutieren und die Hochregulation der endogenen SETD4-Expression vorantreiben. Im Gegensatz zu nukleaseaktivem Cas9 verursacht dCas9 keine Doppelstrangbrüche und verändert die genomische Sequenz nicht, wodurch der native SETD4-Locus erhalten bleibt und die Untersuchung von SETD4-abhängigen Transkriptionsreaktionen am endogenen Locus ermöglicht wird. Dies macht es zu einem wertvollen Werkzeug für Funktionsstudien, die Identifizierung von Zielgenen und die Modellierung der Wiederherstellung des SETD4-Signalwegs in Tumorzellen mit stillgelegtem oder reduziertem SETD4-Ausdruck.

Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.