Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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SERCA1 Double Nickase Plasmid (h): sc-401416-NIC
- Zielspezies: human
- 20 µg transfektionsfertige, aufgereinigte Plasmid DNA; geeignet für 20 Transfektionen
- Das SERCA1 Double Nickase Plasmid (h) wird als Plasmid-Paar geliefert. Die einzelnen Plasmide kodieren für eine D10A mutierte Cas9 Nuklease sowie für je eine unterschiedliche, zielspezifische 20nt guide RNA (gRNA) Sequenz. Dies erlaubt eine hohe Knockout-Effizienz bei gleichzeitig größerer Spezifität als das entsprechende CRISPR/Cas9 KO Plasmid
- gRNA Sequenzpaare liegen ca. 20 bp auseinander um ein spezifisches Cas9-vermitteltes "Double Nicking" der genomischen DNA zu erlauben und so im Resultat den Effekt eines Doppelstrangbruchs nachzuahmen.
- Ein Plasmid kodiert für ein Puromycin-Resistenzgen zur Selektion von stabilen Knockout-Zellen. Das andere Plasmid kodiert für ein GFP-Gen für den visuellen Nachweis der Transfektion
- SERCA1 Double-Nickase-Plasmid (h) und SERCA1 Double-Nickase-Plasmid (h2) kodieren unterschiedliche gepaarte gRNA-Designs, die auf ATP2A1 abzielen. Möglicherweise ist eines oder sind beide Designs verfügbar
- Nach der Transfektion kann die Effizienz des Gen-Knockouts per Western Blot oder histologisch mit folgendem Antikörper überprüft werden: SERCA1: sc-515162
Bestellinformation
| Produkt | Katalog # | EINHEIT | Preis | ANZAHL | Favoriten | |
SERCA1 Double Nickase Plasmid (h) | sc-401416-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
SERCA1 Double Nickase Plasmid (h2) | sc-401416-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
ATP2A1 kodiert die sarkoplasmatische/endoplasmatische Retikulum-Ca²⁺-ATPase SERCA1, eine P-Typ-ATPase, die zytosolisches Ca²⁺ in das sarkoplasmatische Retikulum pumpt, um nach einer Erregung wieder niedrige Ruhe-Ca²⁺-Spiegel herzustellen. Durch die Sequestrierung von Ca²⁺ prägt SERCA1 die Erregungs-Kontraktions-Kopplung, Ca²⁺-abhängige Signalwege sowie die Ca²⁺-Homöostase im ER/SR, die Proteostase und Stressantworten beeinflusst. Die SERCA1-Funktion ist in Signalwege eingebunden, die den Calciumkreislauf und die Muskelenergiebereitstellung steuern, einschließlich der Kopplung an die ryanodinrezeptorvermittelte Ca²⁺-Freisetzung und die Pufferung durch Calsequestrin. Veränderte ATP2A1-Aktivität oder -Expression wurde mit Phänotypen einer Skelettmuskeldysfunktion in Verbindung gebracht und macht das Gen zu einem nützlichen Ziel für mechanistische Studien zur Calciumhandhabung und zur Physiologie von Muskelfasern.
SERCA1 Das Double-Nickase-Plasmid (h) besteht aus einem aufeinander abgestimmten Plasmidpaar, das für die hochspezifische Bearbeitung des ATP2A1-Lokus in human-Zelllinien entwickelt wurde. Jedes Plasmid exprimiert eine Cas9-D10A-Nickase und eine spezifische sgRNA, die auf entgegengesetzte DNA-Stränge innerhalb von ATP2A1 abzielt. Wenn sie auf benachbarte Stellen auf entgegengesetzten DNA-Strängen gerichtet sind, erzeugen die beiden Nickasen versetzte Einzelstrang-Schnitte, die zusammen einen versetzten Doppelstrangbruch erzeugen, was eine koordinierte On-Target-Aktivität beider Guides erfordert. Der resultierende DNA-Bruch wird durch endogene zelluläre Reparaturwege behoben, meist durch nicht-homologe Endverknüpfung (NHEJ), was zu Insertionen oder Deletionen führt, die die ATP2A1-Funktion stören. Durch die Notwendigkeit einer doppelten sgRNA-Bindung am Zielort erhöht der Doppel-Nick-Ansatz die Spezifität der Bearbeitung und bietet eine komplementäre CRISPR-Strategie für Anwendungen, bei denen eine zusätzliche Kontrolle über die Zielgenauigkeit gewünscht ist.
Um eine effiziente Identifizierung editierter Zellen zu unterstützen, kodiert ein Plasmid GFP zur fluoreszierenden Visualisierung transfizierter Populationen, während das Begleitplasmid ein Puromycin-Resistenzgen für die Antibiotika-Selektion trägt. Zusammen unterstützen diese Merkmale eine effiziente Anreicherung co-transfizierter Populationen und vereinfachen die Validierung von Klonen mit ATP2A1-Störung.
Nur für Forschungszwecke. Nicht für diagnostische oder therapeutische Zwecke bestimmt.